由于幼兒急疹的主要病因為HHV-6和HHV-7,故幼兒急疹的檢查可以通過檢查以上兩者來進行。HHV-6和HHV-7一般的實驗室檢測方法包括采集患者的唾液、器官分泌物或外周血單核細胞分離培養(yǎng)病毒、PCR技術檢測病毒DNA以及ELISA法檢測血清中特異性IgM 及IgG抗體等。
1.血常規(guī)檢查 見白細胞總數(shù)減少,伴中性粒細胞減少。也可隨后出現(xiàn)白細胞總數(shù)增多。
2.病毒分離 病毒分離是HHV-6、7型感染的確診方法。HHV-6、7型可在新鮮臍血單核細胞或成人外周血單核細胞中增殖。但需在培養(yǎng)基中加入植物血凝素(PHA)、IL-2、地塞米松等物質(zhì)。感染細胞在7天左右出現(xiàn)病變,細胞呈多形性、核固縮、出現(xiàn)多核細胞。感染細胞出現(xiàn)病變后還可繼續(xù)生存7天,未感染細胞則在培養(yǎng)7天內(nèi)死亡。由于病毒分離培養(yǎng)費時,不適于早期診斷,一般只用于實驗室研究。
3.病毒抗原的檢測 病毒抗原檢測適于早期診斷,但病毒血癥維持時間短,很難做到及時采取標本。目前廣泛采用免疫組化方法檢測細胞和組織內(nèi)病毒抗原??乖栃越Y(jié)果可作為確診的依據(jù)。
免疫組化常用方法:①直接法;②間接法,經(jīng)過第二抗體放大效應是其特點;③PAP法,以過氧化物酶和抗過氧化物酶抗體形成復合物,通過第二抗體的橋接與第一抗體結(jié)合,然后以酶底物反應檢出;④ABC法,生物素(Biotin)和卵白素(Avidin)為具有高度親合性的物質(zhì),一個卵白素分子可結(jié)合4個生物素。當生物素標上特定的標記物質(zhì)后or與抗體結(jié)合后仍能與卵白素結(jié)合,因此,將抗體結(jié)合上生物素,然后與卵白素和帶有特殊標記物的生物素的結(jié)合反應,而以適當方式顯示;⑤S-P法(LSAB),采用生物素標記的第二抗體與鏈霉素生物素蛋白連接的過氧化物酶及基質(zhì)素(底物)混合液來測定細胞和組織中的抗原;⑥EnvisionⅠ法(二步法),其原理為第二抗體上標記有多聚物酶(HRP or AP)復合物與第一抗體結(jié)合。二抗上的多聚物可結(jié)合許多的HRP分子,使信號有顯著提高,敏感性較PAP法,ABC法高出幾十倍,背景因多聚物葡聚糖是人體內(nèi)不存在,無非特異性干擾,尤其是多聚物酶分子結(jié)合的第二抗體孵育時間短,該方法更省時,簡便。
4.病毒抗體的測定 采用ELISA方法和間接免疫熒光方法測定HHV-6、7型IgG、IgM抗體,是目前最常用和最簡便的方法。IgM抗體陽性,高滴度IgG以及恢復期IgG抗體4倍增高等均可說明HHV-6、7感染的存在。當從腦脊液內(nèi)測到IgM抗體或IgG抗體時,提示中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的存在。IgM抗體一般產(chǎn)生于感染后5天,可持續(xù)存在2~3周,IgG抗體于感染后7天產(chǎn)生,4周后達高峰,可持續(xù)長時間。但由于皰疹病毒之間存在一定抗原交叉,其他皰疹病毒感染也可引起抗體增高,可用抗補體免疫熒光試驗加以鑒別。
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來,發(fā)展十分迅速,目前已被廣泛用于生物學和醫(yī)學科學的許多領域
5.病毒核酸檢測 采用核酸雜交方法及PCR方法可以檢測HHV-6、7 DNA。由于HHV-6、7均存在潛伏感染,因此有時檢測出病毒的DNA,并不能確定處于潛伏狀態(tài)或激活狀態(tài)??捎枚俊攵縋CR來測定DNA的量,來明確是否存在活動性感染。高濃度的病毒DNA提示活動性感染的存在。
聚合酶鏈式反應,其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應組成一個周期,循環(huán)進行,使目的DNA得以迅速擴增,具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、省時等特點。它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究,還可用于疾病病的診斷或任何有DNA,RNA的地方。
對HHV-6、7感染的診斷,應結(jié)合臨床表現(xiàn)及多項病因?qū)W檢查結(jié)果進行綜合判斷。
一般病例無需特殊檢查,必要時可做X線胸片、心電圖等檢查。